以下是 Kromasil 色譜分析柱（以反相C18柱為例）的詳細操作指南，涵蓋安裝、平衡、樣品分析、維護及故障處理等內容，適用于高效液相色譜（HPLC）或超高效液相色譜（UHPLC）系統：

　　一、分析柱基本信息

　　品牌：Kromasil（瑞典，色譜柱品牌）

　　常見類型：C18、C8、苯基柱、HILIC等（以 Kromasil 100-5-C18 為例，5μm粒徑，100?孔徑）。

　　適用系統：HPLC、UHPLC（需確認柱壓上限與系統匹配）。

　　二、操作流程

　　1. 色譜柱安裝

　　步驟：

　　沖洗系統：先用甲醇或異丙醇沖洗管路，排除氣泡。

　　連接柱體：

　　確認流向標識（箭頭方向為流動相流向）。

　　使用無死體積接頭，手擰至“finger-tight”后，再用扳手擰1/4圈（避免過緊導致漏液或柱頭損壞）。

　　檢漏：以低流速（0.2 mL/min）運行流動相，檢查接口是否漏液。

　　2. 色譜柱活化與平衡

　　新柱活化：

　　用 100%甲醇 沖洗：5倍柱體積（如250mm×4.6mm柱約需15mL）。

　　過渡至流動相：梯度切換至初始流動相比例（如甲醇:水=70:30）。

　　平衡：

　　以工作流速（如1.0 mL/min）沖洗至少10倍柱體積，直至基線穩定（UV檢測器信號波動＜±1%）。

　　3. 樣品分析

　　進樣前處理：

　　樣品需用流動相或弱溶劑溶解，避免使用強溶劑（如純甲醇）直接進樣導致峰形畸變。

　　過濾（0.22μm濾膜）防止柱頭堵塞。

　　方法設置：

　　流速、柱溫、檢測波長需與分析方法匹配（如C18柱常用30~45℃）。

　　梯度洗脫程序需平穩過渡，避免壓力驟變。

　　4. 關機與保存

　　短期停用（<48小時）：

　　沖洗后保存在 純甲醇 或 乙腈 中（避免水相滋生微生物）。

　　長期停用：

　　沖洗后密封保存，標注保存溶劑。

　　三、日常維護與注意事項

　　1. 壓力監控

　　正常壓力：新柱壓力應接近系統基線壓力（如5~10 MPa）。

　　異常升高：

　　可能原因：柱頭篩板堵塞、填料塌陷、顆粒污染。

　　處理：反向沖洗（需確認柱耐受性）或更換篩板。

　　2. 柱效檢查

　　測試標準品：如萘、甲苯（反相柱），計算理論塔板數（N≥2000/m為正常）。

　　峰形異常：拖尾（可能柱頭污染）或前沿（樣品溶劑過強）需優化方法。

　　3. 清洗與再生

　　污染物類型 | 清洗方案

　　脂溶性：100%甲醇→異丙醇→正己烷（梯度過渡）。

　　蛋白質：0.1% TFA水溶液→乙腈。

　　鹽析：先用高水相（如95%水）沖洗，再過渡至有機相。

　　四、常見問題與解決

　　問題可能原因解決方案

　　壓力過高篩板堵塞、填料塌陷反向沖洗或更換篩板

　　峰形拖尾柱頭污染、死體積大清洗柱頭或更換保護柱

　　保留時間漂移柱溫波動、流動相比例變化穩定溫度、重新平衡色譜柱

　　基線噪音流動相污染、氣泡過濾流動相、脫氣

　　五、注意事項

　　避免機械震動：搬運或安裝時輕拿輕放，防止填料床擾動。

　　pH范圍：硅膠基質柱通常耐受pH 2-8（超出會溶解硅膠）。

　　保護柱建議：復雜樣品建議加裝保護柱（同類型填料），延長分析柱壽命。

　　六、保存與報廢

　　報廢標準：柱效下降＞30%、壓力持續異常或峰形無法恢復。

　　環保處理：按實驗室危廢規范處置（含有機溶劑殘留）。

　　通過規范操作和定期維護，Kromasil色譜柱可保持高分離效能和長使用壽命。具體方法需結合實驗條件優化（參考廠家手冊，如 Kromasil Technical Guide）。